陳立偉 于仁峰

　　聯(lián)勤保障部隊(duì)第九六五醫(yī)院

　　摘要：免疫層析技術(shù)（ICA）是一種將抗原抗體特異性反應(yīng)與色譜層析技術(shù)相結(jié)合的新型膜檢測(cè)分析方法，是目前最常用的即時(shí)檢驗(yàn)技術(shù)（POCT）。此類技術(shù)除了具有操作簡(jiǎn)易、反應(yīng)迅速和時(shí)耗較短等特點(diǎn)外，還兼具低成本和高特異性，尤其適用于臨場(chǎng)檢測(cè)。20 世紀(jì)90 年代以來，免疫層析技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域、獸藥殘留檢測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、疾病診斷等多個(gè)方面都有廣泛的應(yīng)用。隨著科技的發(fā)展，標(biāo)記材料不斷更新?lián)Q代，熒光材料、磁性納米顆粒等新型的標(biāo)記材料逐漸應(yīng)用到ICA 中。標(biāo)記材料的變化和分析儀器的應(yīng)用推動(dòng)ICA 方法向高靈敏度和定量檢測(cè)的方向發(fā)展。

　　關(guān)鍵詞：免疫層析技術(shù)；膠體金；免疫熒光材料

　　免疫層析法（Immunochromatography）是20 世紀(jì)80 年代初期在國(guó)外興起的一種快速診斷技術(shù)，該分析技術(shù)操作簡(jiǎn)單、快速、便捷、結(jié)果易于判斷、無須特殊的檢測(cè)設(shè)備[1]。隨著各類新技術(shù)的發(fā)展，免疫層析技術(shù)也在不斷更新?lián)Q代，標(biāo)記物的改良使得結(jié)合墊上的標(biāo)記物多種多樣，從傳統(tǒng)的膠體金材料到熒光納米微粒、熒光微球、量子點(diǎn)等標(biāo)記物的開發(fā)利用，免疫層析技術(shù)也迎來了新的發(fā)展篇章。

　　1 免疫層析技術(shù)的標(biāo)記材料

　　免疫層析技術(shù)關(guān)鍵在于依靠標(biāo)記抗體的免疫標(biāo)記材料，標(biāo)記材料的良好特性有助于提高和判斷免疫層析檢測(cè)的靈敏度和效果，因而免疫層析的發(fā)展取決于免疫標(biāo)記材料的發(fā)展進(jìn)步。

　　1.1 膠體金免疫層析

　　檢測(cè)于1 測(cè)出沙門菌表面抗原而提出。在人類醫(yī)學(xué)和動(dòng)物醫(yī)學(xué)的臨床檢驗(yàn)、疾病檢測(cè)、食品安全檢測(cè)以及其他相關(guān)領(lǐng)域中，膠體金技術(shù)都有相當(dāng)廣泛的應(yīng)用。在動(dòng)物性食品安全檢測(cè)、動(dòng)物疾病的臨床檢測(cè)及防控上，近年來膠體金試紙條也有大量的創(chuàng)新和應(yīng)用，為生產(chǎn)管理提供了便利。

　　1.2 以新材料為標(biāo)記物的免疫層析

　　雖然目前市場(chǎng)上的主流側(cè)向?qū)游霎a(chǎn)品還是基于膠體金技術(shù)的試紙條，但是隨著材料技術(shù)的不斷發(fā)展，越來越多的以各類納米熒光材料為主的新標(biāo)記材料被開發(fā)應(yīng)用于側(cè)向免疫層析，效果卓著。

　　1.2.1 熒光微球免疫層析

　　用于熒光微球免疫測(cè)定（FMIA）的微球材料常見的有硅、磁、硒及高分子材料等，直徑在納米級(jí)到微米級(jí)間。相比于最早的熒光素標(biāo)記法，微球可以較好地保護(hù)熒光物質(zhì)，增加熒光的穩(wěn)定性。近年也已發(fā)展出了用于免疫層析的新型聚集誘導(dǎo)發(fā)射熒光微球（AIEFM）。

　　1.2.2 量子點(diǎn)

　　量子點(diǎn)被認(rèn)為是免疫層析中最有前途的熒光半導(dǎo)體納米材料，與一般熒光染料相比，量子點(diǎn)具有尺寸可調(diào)的熒光。

　　1.2.3 上轉(zhuǎn)換發(fā)光技術(shù)

　　上轉(zhuǎn)換發(fā)光技術(shù)即以稀土金屬元素（主要是鑭系）構(gòu)成的納米或亞微米顆粒作為標(biāo)記物的免疫層析技術(shù)。雷萌等研制基于上轉(zhuǎn)換納米熒光快速定量檢測(cè)降鈣素原的免疫層析檢測(cè)技術(shù)，基于上轉(zhuǎn)換發(fā)光尤其適用于復(fù)雜樣本的檢測(cè)的特點(diǎn)，可以開發(fā)基于上轉(zhuǎn)換發(fā)光的多聯(lián)檢測(cè)試紙條。

　　1.2.4 磁性納米微球

　　基于超順磁納米顆粒（MNPs）作為標(biāo)記物的免疫層析方法，利用磁信號(hào)分析儀（MAR）實(shí)現(xiàn)對(duì)膜上信號(hào)的完整讀取，取代免疫層析法中傳統(tǒng)測(cè)試儀去讀取可見光或熒光，不用去考慮膜的厚度問題，這樣可以把靈敏度提高10-1000 倍，而且試紙條在長(zhǎng)時(shí)間放置后磁信號(hào)并不會(huì)有明顯損失，生物材料中有鮮有磁信號(hào)。

　　1.2.5 適配體

　　傳統(tǒng)的免疫層析法用抗體作為標(biāo)記物和捕獲物，現(xiàn)在隨著指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)（SELEX）的應(yīng)用，配對(duì)的適配體也逐漸篩選出來。適配體相對(duì)于傳統(tǒng)的抗體來講，具有諸多的優(yōu)勢(shì)：篩選周期短，親和力和穩(wěn)定性高，由于適配體的諸多優(yōu)點(diǎn)以及SELEX 技術(shù)的逐漸成熟應(yīng)用，在免疫層析上用適配體來代替抗體檢測(cè)是一個(gè)好的方向。

　　2 免疫層析技術(shù)的應(yīng)用

　　近年來，由于環(huán)境變化，科技發(fā)展，人與人交流廣泛，各種感染性疾病流行，基層現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)（POCT）需求迅速增長(zhǎng)。在POCT 眾多檢測(cè)手段中，免疫層析技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快捷、結(jié)果可直接讀取等優(yōu)點(diǎn)，并且隨著新興納米熒光材料的引用，免疫層析技術(shù)的檢測(cè)靈敏性和準(zhǔn)確性也有顯著提高，近年來也越來越多的應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢測(cè)等領(lǐng)域。

　　2.1 醫(yī)學(xué)領(lǐng)域

　　在醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，人HCG 膠體金診斷試紙條已作為早孕初篩方式被廣為應(yīng)用，成為免疫層析法檢測(cè)試紙條最好的應(yīng)用實(shí)例。隨著納米熒光材料的引入及更新?lián)Q代，免疫層析技術(shù)也有了飛躍的發(fā)展，在醫(yī)療領(lǐng)域有了更廣泛的應(yīng)用。

　　2.2 食品安全領(lǐng)域

　　隨著人類社會(huì)的迅速進(jìn)步，越來越多的食品原材料被搬入餐桌，同時(shí)，食品安全問題也得到越來越多的關(guān)注。近年來，食物安全問題已給人類帶來巨大的困擾。免疫層析技術(shù)的引入解決了這一難題。檢測(cè)食品毒性及農(nóng)藥殘留等方面的免疫層析試紙條能夠快速讀取檢測(cè)結(jié)果，方便大眾操作。

　　2.3 環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域

　　近年來，環(huán)境污染已成為重大的威脅人類健康生存的問題。隨著人們關(guān)注度的提高及免疫層析技術(shù)材料的更新?lián)Q代，也逐漸擴(kuò)大免疫層析技術(shù)在環(huán)境監(jiān)測(cè)領(lǐng)域的適用性。

　　3 結(jié)論和展望

　　本綜述介紹了免疫層析法的主要標(biāo)記物種類及其在POCT 的應(yīng)用，經(jīng)過幾十年的發(fā)展，從最初的膠體金，到后來的量子點(diǎn)、稀土發(fā)光材料、上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料、超順磁納米微球和適配體等，以及本文中還未提及的脂質(zhì)體等材料，各種材料都被人們發(fā)現(xiàn)并運(yùn)用，使得免疫層析得到長(zhǎng)足的發(fā)展和廣泛應(yīng)用。定量、提高靈敏度、多聯(lián)檢測(cè)和環(huán)保是未來依然要努力的方向?？傊?，多種多樣的標(biāo)記材料已經(jīng)在免疫層析法上有所使用，也各自展現(xiàn)了自己的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，應(yīng)進(jìn)一步對(duì)此深入研究，以使得其更好地應(yīng)用于臨床檢測(cè)、食品檢測(cè)和環(huán)境監(jiān)測(cè)等。

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1]Wang L, Lu D, Wang J, et al. A novel immunochromatographic electrochemical biosensor for highly sensitive and selective detection of trichloropyridinol, a biomarker of exposure to chlorpyrifos[J].Biosensors & Bioelectronics: The International Journal for the Professional Involved with Research, Technology and Applications of Biosensers and Related Devices,2011,26(6):2835-2840.

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